أنتاج أنز م البكتن ز من فطر Aspergellus niger الفواكه. الهام إسماع ل الشمري المعزول محل ا باستخدام قشور بعض ب داء حاتم كاظم * قسم علوم األغذ ة والتقانات اإلح ائ ة - كل ة الزراعة - جامعة بغداد - elhamfadel@yahoo.com المستخلص تم الحصول على عشرة عزالت من الفطر ات والت عزلت من بعض النماذج للفضالت الزراع ة ثالث من هذه العزالت ذات فعال ة عال ة إلنز م البكتن ز مقارنة بالعزالت األخرى باالعتماد على قطر اوي على بكت ن تجاري كمصدر وح د للكاربون شملت هذه المنطقة الشفافة المتكونة ف الوسط الح ) 1.penicillum spp.(p تنتج (A 1 ) Aspergillus spp ثم العزالت( Aspergillus niger(a 2 تتبعها العزالت الثالث إنز م البكتن ز باستخدام فضالت زراع ة مختلفة شملت قشور البرتقال وقشور التفاح وقشور A )األفضل 2 )A.niger إلنتاج البكتن ز على الوسط الحاوي الموز كمصدر وح د للكاربون كانت العزلة 675 و 370 وحدة /ملغم على قشور البرتقال كمصدر وح د للكاربون. بلغت الفعال ة اإلنز م ة للبكتن ز smf (باستخدام بروت ن على التوال باستخدام طر قة التخمرات الصلبة والطر قة المغمورة) العزلةA.niger ( A). 2 الحظ المستوى العال للفعال ة اإلنز م ة إلنز م البكتن زبؤستخدام التخمرات الصلبة مقارنة بالطر قة المغمورة. كما الحظ ان قشور البرتقال ه مادة ج دة ورخ صة الثمن إلنتاج البكتن ز من العزلة ق د الدراسة. الكلمات المفتاح ة : أنز م البكتن ز niger Aspergillus المقدمة تعد عمل ة أنتاج اإلنز مات من الحقول النام ة ذات المستقبل الواعد ف مجال التقن ة الح و ة إذ بلغت السوق العالم ة لإلنز مات 1.5 بل ون ووصلت إلى الضعف عام 2008 والجزء األكبر من اإلنز مات الصناع ة مصدرها ما كروب Lali( وآخرون 2009 Vibh 2010 ). تعرف مجموعة اإلنز مات المحللة للبكت ن ب Pectinase والت حفز إنتاجها بوجود البكت ن ( Alkort وآخرون 1998 ; Adriana وآخرون 2002 ; Ahlawat وآخرون.)2007 والبكت ن عبارة عن سكر ات متعددة حامض ة عال ة الوزن الجز ئ الترك ب األساس ف ها هو جز ئات -D Rhamnose عدد قل ل من جز ئات ) 4-1 )مع α مرتبطة مع بعضها بآصرة galacturonic acid ف السلسلة الرئ سة و Arabinose و Xylose ف السلسلة الجانب ة ( Venugopal وآخرون 2007(. تعمل انز مات البكتن ز على كسر اآلصرة الكال كوس د ة لسلسلة الكاربون الطو لة وتشمل هذه اإلنز مات Polygalactoronase و Pectinlyase و Pactalelyase وesterase Nalalia) Pectin وآخرون ; 2004 Dalvi و Reda ; 2006 Anthappan وآخرون ) 2008. تار خ استالم البحث. 2011 / 10 / 13 تار خ قبول النشر. 2011 / 1 / 8 تعد النباتات واألح اء المجهر ة المصدر ن الرئ س ن إلنز م البكتن ز ولكن الرإ ا االقتصاد ة والتقن ة تش ر إلى أن المصادر الما كروب ة للبكتن ز أصبحت وبسرعة كب رة األهم من ب ن المصادر األخرى ( Marie وآخرون 2002 ; Nazneen وآخرون 2011 (. وتعد األح اء المجهر ة الت تمتلك فعال ة 257
لتحل ل البكت ن واسعة االنتشار فه موجودة ف التربة والفواكه والخضروات التالفة واألوراق المصابة والخشب ( Jayani وآخرون.)2005 عزل مإخرا عدد كب ر من األح اء المجهر ة من مواد مختلفة تتم ز بقدرتها على تحط م السكر ات المتعددة الموجودة ف الفواكه والخضر المنتجة للبكتن زات ( Dalvi وAnthappan 2006 (. هناك أنواع كث رة من السالالت البكت ر ة والخمائر واالعفان المنتجة للبكتن ز وترك ب اإلنز مات المحللة للبكت ن متنوع ماب ن األح اء المجهر ة) Marie وآخرون 2002 ; وNazneen وآخرون 2011 ) ومن األنواع البكت ر ة المنتجة إلنز م البكتن ز ه بكتر ا spp. Bacillus و spp. Clostridum و spp. Psedomonas أما الفطر ات فمنها spp. Aspergillus وMonillalaxa و. spp Fusarium و.)2010 Vibha( Polyporussquamosus lanuginosusthermomycesو أكدت العد د من الدراسات على استخدام اإلنز مات الفطر ة ف العمل ات التصن ع ة وذلك الن الفطر ات فعالة جدا ف إنتاج اإلنز مات المحللة للبكت ن وخصوصا فطر Aspergillus niger األكثر استخداما لكونه فطر مصنف عالم ا كفطر أمن ( GRAS ) من قبل المنظمة األمر ك ة للغذاء والمصدق على استخدامه ف تصن ع األغذ ة ( Cao وChen Bruhlmaum ; 1992 وآخرون 1994 ; Adriana وآخرون 2002 ; Ladjamo وآخرون.)2007 تستخدم إنز مات Pectinases بصورة واسعة ف مجال البا وتكنولوج وف الكث ر من المجاالت التصن ع ة فه تستخدم ف استخالص وتنق ة عصائر الفواكه إذ إنها تز د من الناتج إضافة لترو قه كما إن استخدام اإلنز مات ف تصن ع العصائر إدي إلى تقل ل اللزوجة وز ادة ف سرعة الجر ان مما إدي إلى تقل ص وقت العمل ة التصن ع ة دون الحاجة إلى عمل ة العصر وتستخدم ف إزالة الضباب ة وتثب ت اللون األحمر للمشروبات الكحول ة ( Jayani وآخرون 2005 ; Vivek وآخرون 2010( وف عمل ة تخم ر الشاي والقهوة ( Evnesto وآخرون 2006( كما تستخدم ف استخالص الصبغات ف المواد النبات ة ( Urmila وآخرون 2005 ) ومن التطب قات األخرى لها هو استخدامها ف عج نة وصناعة الورق وف استخالص الز وت وتنق ة فا روسات النبات وف المنظفات الح و ة و انشطار البروتوبالست وف الصناعات النس ج ة ومعالجة الفضالت وتغذ ة الح وانات Salazar( وJayasinghe 1999 ; Reid و Hoondel ; 2000 Ricard وآخرون 2000 ; Kashyap وآخرون 2001 ; Revilla وآخرون 2003 ; Ranveer وآخرون 2005.) تعد الفضالت الح و ة الناتجة من الفضالت الصناع ة والزراع ة والنواتج العرض ة لبعض الصناعات مثل قشور البرتقال وبقا ا قصب السكر ونخالة الحنطة وبقا ا العمل ات التصن ع ة األخرى ذات قابل ة عال ة على التلف ورم ها حدث مشاكل كب رة ف العمل ات التصن ع ة لذا فؤن استخدام مثل هذه الفضالت ف أنتاج اإلنز مات ومواد ذات ق مة مثل الغاز الح وي واال ثانول وحامض الستر ك ومركبات النكهة واألحماض الدهن ة والكتلة الح و ة باستخدام تكنولوج ا التخمر عد انجازا مهما من الناح ة االقتصاد ة باستخدام الكائن المجهري المناسب ( Nalalia وآخرون 2004 ; Dalvi وAnthappan Reda ; 2006 وآخرون 2008 ; Venkatesh وآخرون 2009.) هدفت هذه الدراسة إلى استخدام قشور بعض الفواكه كالبرتقال والتفاح والموز الرخ صة الثمن كمواد أساس ف إنتاج أنز مات البكتن ز المهمة ف العمل ات التصن ع ة من الفطر ات باستخدام تخمرات الحالة الصلبة والطر قة المغمورة وتحد د األفضل ف أنتاج أنز مات البكتن ز. المواد وطرائق البحث عزل وتشخ ص الفطر ات المنتجة للبكتن ز: مصادر العزل: 258
استخدمت ف العزل مجموعة من الفواكه التالفة المؤخوذة من السوق المحل ة والمتمثلة بالبرتقال التالف والاللنك التالف والتفاح التالف إضافة إلى استخدام التربة كؤحد مصادر العزل. عزل الفطر ات : وسط العزل: أستخدم ف عمل ة العزل للفطر ات الوسط المذكور من قبل Okafor وآخرون ( ) 2010 والمحور بإضافة 1 مل لتر من محلولmineral Trace والمتكون من : 0.04 %Na2 B4o7 و 0.008%Mn So4 وأض ف % 0.1 من المضاد الح وي Ampicilin إلى وسط العزل بعد أجراء عمل ة التعق م. طر قة العزل: أجر ت عمل ة العزل حسب الطر قة الت أوردها Okafor وآخرون )2010(. حفظت العزالت المستحصل عل ها باستخدام وسط مائل من PDA ف الثالجة بدرجة حرارة 4 م. شخصت العزالت على مستوى الجنس اعتمادا على الخواص المورفولوج ة للفطر باستخدام المجهر الضوئ باالعتماد على المفتاح الخاص بتشخ ص االعفان Harrigan( وMcCance 1976(. تحض ر عالق السبورات: حضر عالق السبورات لالعفان المعزولة حسب الطر قة الت أوردها Vivek وآخرون ( 2010 ) وذلك بتحض ر وسط PDA وتعق مه وصبه ف أطباق معقمة وتلق حه بالتخط ط من العزالت النق ة المستحصل عل ها وحضنها بدرجة حرارة 30 م لمدة 3 أ ام. أض فت بعدها وف ظروف معقمة 5 مل من الماء المقطر الحاوي على % 1 80 Tween وغسلت السبورات ونقلت إلى أناب ب معقمة. حفظت األناب ب بالثالجة بدرجة حرارة 4 م. اختبار قدرة العزالت على إنتاج البكتن ز: أجر ت الغربلة النوع ة للعزالت المستحصل عل ها الختبار قدرتها على إنتاج أنز مات البكتن ز باستخدام وسط Czapek Dox agar المحور باستخدام باستبدال مصدر الكاربون بالبكت ن. عقم الوسط وصب ف أطباق بتري معقمة وترك ل تصلب وعمل ف ه حفر بؤحجام متساو ة ف كل طبق ولقحت األطباق ب 1 مل من عالق السبورات لكل عزلة ف كل حفرة ( حوي المل لتر الواحد على 10 6 سبور/مل (. حضنت األطباق بدرجة حرارة 30 م مدة 5 أ ام. حددت المنطقة الشفافة المتكونة باستخدام محلول.)2009 Simb ; 2008 وآخرون Reda ( Logule, s Iodine Solution الغربلة الكم ة للعزالت المنتجة للبكتن ز باستخدام بعض قشور الفواكه حضرت قشور الفواكه والمتمثلة بقشور التفاح والبرتقال والموز حسب الطر قة الت أوردها Vivek وآخرون (2010) جمعت كم ة كاف ة منها وقطعت بؤحجام متساو ة تقر با وجففت بفرن حراري هوائ بدرجة حرارة 55 م لح ن ثبوت الوزن. طحنت النماذج بمطحنة كهربائ ة وحفظت ف عبوات زجاج ة بع دا عن الرطوبة. أض فت نماذج القشور المطحونة إلى وسط إنتاج البكتن ز والمتمثل بوسطagar Czapek Dox المحور باستبدال مصدر الكاربون بقشور البرتقال. عقم الوسط وصب ف أطباق بتري معقمة وترك ل تصلب وعمل ف وسطه ثقوب بؤقطار متساو ة وتحت ظروف معقمة. لقحت األطباق ب 1 مل من عالق السبورات ( حوي المل لتر الواحد على 10 6 سبور/مل ) للعزالت الت لها القدرة على أنتاج أنز م البكتن ز والناتجة من التجربة السابقة. أع دت التجربة نفسها باستبدال قشور البرتقال بقشور التفاح مرة وبقشور الموز مرة أخرى. حضنت جم ع األطباق بدرجة حرارة 30 م لمدة 5 أ ام. ق ست المنطقة الشفافة المتكونة حول الحفر بإضافة محلول Logule, s Iodine Solution باستخدام المسطرة وثبتت النتائج. تشخ ص العزلة A2 على مستوى النوع 259
شخصت العزلة A 2 على مستوى النوع ( Species ) باالعتماد على المفات ح التصن ف ة المذكورة ف Raper و ( Fennell 1965 ) و Domsch و (1988) Gam وباستخدام المجهر الضوئ االعت ادي و Stage micrometer و. Ocular micrometer أنتاج أنز م البكتن ز من الفطر Aspergillus niger بطر قة تخمرات الحالة الصلبة والطر قة المغمورة باستخدام قشور البرتقال والتفاح استخدمت العزلة األفضل إنتاجا إلنز م البكتن ز من التجربة السابقة والمتمثلة ب A.niger باستخدام تخمرات الحالة الصلبة والطر قة المغمورة باستخدام قشور التفاح والبرتقال والت أعطت أعلى فعال ة إلنز م البكتن ز من التجربة السابقة باستخدام العزلة المختارة. استخدمت الطر قة المتبعة من قبل Natalia وآخرون ( 2004) ف أنتاج اإلنز م بطر قة الصلبة وذلك بوزن 10 غم من قشور البرتقال والتفاح المحضرة مسبقا ووضعت كل منها ف دوارق سعة 250 مل وعقمت بالمإصدة بدرجة حرارة 121 م 2 وضغط 15 باوند/انج لمدة 40 دق قة أض ف لها بعد التعق م وبظروف معقمة 10 مل من محلول المغذ ات 2 المعقم بالمإصدة بدرجة حرارة 121 م وضغط 15 باوند/انج لمدة 15 دق قة والحاوي على %0.1(.) Mg So 4.7H 2 O%0.1 NH 4 H 2 Po 4 %0.1 NH 4 No 3 لقح الوسط ب 10 مل من عالق سبورات الفطر المعزول) حوي المل لتر الواحد على 10 6 سبور/مل (. حضنت الدوارق بدرجة حرارة 30 م مدة 5 أ ام ف حاضنة هزازة 200 دورة/دق قة. أنتج اإلنز م أ ضا بطر قة التخمرات المغمورة لغرض المقارنة ب ن الطر قت ن ف أنتاجها لإلنز م وذلك بتحض ر مستخلص قشور البرتقال والتفاح حسب الطر قة المذكورة من قبل Vivekوآخرون ) 2010 )وذلك بوزن 100 غم من كل من قشور البرتقال والتفاح ف دوارق زجاج ة وأض ف لكل منهما 1600 مل من الماء المقطر ووضعت على صف حة ساخنة ( plate )Hot بدرجة حرارة 100 م مدة 3 ساعات. حفظ المستخلص ف الثالجة بدرجة حرارة 4 م وأخذ 100 مل منه وأض ف له 10 مل من محلول المغذ ات المذكور سابقا ولقح ب 10 مل من عالق السبورات وحضنت الدوارق بدرجة حرارة 30 م لمدة 5 أ ام ف حاضنة هزازة 200 دورة/دق قة. استخالص اإلنز م الخام Crud enzyme أستخلص اإلنز م الخام من المزارع الصلبة حسب الطر قة الت أوردها Vibha ( 2010 )بإضافة 100 مل من دارئ ) M 0.05 PH 5.5 ( Sodium acetate على مكونات الدوارق المتخمرة ومزج الوسط ج دا ثم أجر ت عمل ة ترش ح تحت التفر غ ومن ثم أجراء عمل ة النبذ المركزي ( 10000 دورة/دق قة( مدة 20 دق قة وجمع الراشح ل مثل اإلنز م الخام. أما ف المزارع المغمورة فؤجر ت مباشرة عمل ة النبذ المركزي للمزرعة السائلة وجمع الراشح وقدرت الفعال ة اإلنز م ة لجم ع النماذج. تقد ر البروت ن قدر البروت ن ف المستخلص اإلنز م الخام بالطر قة المطلقة وحسبما أوردها Whitaker و (1980) Glanum بق اس االمتصاص الضوئ باستخدام األطوال الموج ة 235 و 280 وباستخدام جهاز المط اف. Spectrophotometer تقد ر فعال ة البكتن ز قدرت فعال ة البكتن ز باستخدام بكت ن الحمض ات كمادة أساس ة. حوي خل ط التفاعل على كم ات متساو ة من محلول %1 من البكت ن المحضر ف دارئ ) M 0.05 PH 5.5 ( Sodium acetate وتخف ف مناسب من اإلنز م الخام. حضن المز ج بدرجة حرارة 50 م ف حمام مائ لمدة 30 دق قة أض ف بعدها للتفاعل 1 مل من Dinitrosalycylic acid Solution(DNS) Miller( 1959 (اغل الخل ط لمدة 10 دقائق ثم برد وقرأ االمتصاص الضوئ 260
على طول موج 540 نانوم تر باستخدام Spectrophotometer وقدرت الفعال ة باالعتماد على المنحنى الق اس لحامض الكالكتورونك acid( ) Galactouronic المحضر سابقا. عرفت وحدة الفعال ة بؤنها كم ة )1µmol من Galactouronic acid لكل دق قة تحت ظروف 1 ما كرومول ( اإلنز م الالزمة لتحر ر التجربة. النتائج والمناقشة عزل الفطر المنتج إلنز م البكتن ز أجر ت عمل ة العزل باستخدام مصادر عزل محل ة مختلفة وتم الحصول على عشر عزالت Harrigan و )جدول 1 ( شخصت أجناسها باالعتماد على الخصائص المورفولوج ة لألجزاء التكاثر ة (.)1976 MaCance جدول. 1 العزالت المستحصل عل ها ومصادرها وأجناسها. جنسها مصدرها العزلة Aspergillus Penicillium Penicillium Fusarium Aspergillus Aspergillus Fusarium Penicillium Aspergillus Moniliella برتقال تالف برتقال تالف اللنك تالف اللنك تالف تفاح تالف تفاح تالف تفاح تالف تربة تربة تربة A 1 P 1 P 2 F 1 A 2 A 3 F 2 P 3 A 4 M 1 اختبار قدرة العزالت على أنتاج أنز م البكتن ز أستخدم وسط Czapek Dox agar المحور بإضافة البكت ن كمصدر وح د للكاربون بدل السكروز ف أجراء الغربلة النوع ة للعزالت المستحصل عل ها إذ أشار Galiotou وآخرون ( 1993) وCrottie وآخرون ( 1999 )إلى أن أفضل وسط إلنتاج البكتن ز هو الوسط الحاوي على مواد بكت ن ة محثة إلنتاج اإلنز م. وضح الشكل ( 1( نتائج الغربلة النوع ة للعزالت المستحصل عل ها إذ تم الحصول على ثالث عزالت فطر ة ( 1 ) P 1 A 2 A تم زت بقدرتها على أنتاج أنز م البكتن ز بكم ات كب رة وتحت الظروف نفسها وذلك من خالل اختبار قدرتها على تكو ن المنطقة الشفافة من خالل اختبار قدرتها على تكو ن المنطقة الشفافة الناتجة من تحلل بكت ن الوسط بؤنز م البكتن ز المنتج من الفطر باستخدام كاشفSolution Madhav(Logule, s Iodine و.)2002 Pushpalatha اختبار قدرة العزالت على أنتاج أنز م البكتن ز باستخدام بعض قشور الفواكه اختبرت قدرة العزالت على أنتاج انز م البكتن ز نوع ا أو بصورة شبه كم ة باستخدام قشور التفاح والبرتقال والموز المجففة والمطحونة ألخذ تصور واضح عن قابل ة العزالت على إفراز اإلنز م كما ونوعا Davis) و Blevins 1979( إذ وضح الجدول ( 2( أقطار المناطق الشفافة الت أحدثتها كل عزلة باستخدام األوساط المختلفة مع مالحظة تفوق العزلة A2 المعزولة من التفاح التالف ف 261
2 أنتاجها ألنز م البكتن ز على وسط قشور البرتقال مقارنة بالعزالت األخرى 4 سم ف ح ن بلغ أعلى أنتاج 2 لإلنز م للعزلت نA1 وP1 3.4 3.7 سم على التوال على وسط قشور البرتقال. وبذلك وقع االخت ار على العزلة A2 وقشور البرتقال إلكمال هذه الدراسة. Czapek Dox agar )P 1 A 2 شكل. 1 المحور. العزالت األفضل إنتاجا للبكتن ز) 1 A باستخدام وسط جدول. 2 العزالت المستحصل عل ها ومصادر عزلها وأقطار المنطقة الشفافة المتكونة بفعل إنز م البكتن ز المنتج من العزالت باستخدام قشور التفاح والبرتقال والموز كمصدر للكاربون. العزلة مصدرها قطر المنطقة الشفافة )سم (باستخدام قشور التفاح بعد 5 أ ام من الحضن قطر المنط قة الشفافة )سم (باستخدام قشور البرتقال بعد 5 أ ام من الحضن قطر المنطقة الشفافة)سم ) باستخدام قشور الموز بعد 5 أ ام من الحضن 2.2 4 A 2 التفاح التالف 3.8 2.4 3.4 P 1 البرتقال التالف 2.9 1.8 3.7 A1 البرتقال التالف 3.1 Aعلى 2 مستوى النوع ) 3 اعتمدت لتشخ ص العزلة تشخ ص العزلة A2 على مستوى النوع أجر ت مجموعة اختبارات كما موضحة ف جدول ( و ( Fennel 1965 ) Raper وباالعتماد على المراجع العلم ة الخاصة بتصن ف الفطر ات والت شملت. و Domsch و 1988( Gams ) والت صنفت على أساسها Aspergillus niger االختبارات المورفولوج ة لتشخ ص العزلة A 2 على مستوى النوع. 262 جدول 3.
المكون Vesicle Conidiophores Conidia Conidal heads صفاته كرو ة الشكل او قر بة من الشكل الكروي ذات لون بن متدرج لم تجاوز طولها 4 مل لتر كرو ة الشكل غ ر منتظمة وخشنة مع وجود نتوءات وذات قطرµ4.5 كروي الشكل متفرع إلى صفوف منتظمة اوغ ر منتظمة إلى السالسل الكون د ة ذات لون أسود أو أسود مائل للبن واألسود الكاربون اختبار فعال ة إنز م البكتن ز اختبرت فعال ة إنز م البكتن ز الخام المنتج من العزلة Aspergillus niger باستخدام قشور البرتقال كمادة أساس شكل ( 2( بطر قة تخمرات الحالة الصلبة والطر قة المغمورة إذ الحظ أن هنالك ارتفاع واضح ف فعال ة اإلنز م باستخدام تخمرات الحالة الصلبة مقارنة بالطر قة المغمورة إذ بلغت الفعال ة 675 و 370 وحدة/ملغم على التوال. وقد أشار Okafor وآخرون ( 2010 )ارتفاع فعال ة إنز م البكتن ز المستحصل عل ه من فطر A.niger و فطرchrysogenum Penicillum بطر قة تخمرات الحالة الصلبة SSF مقارنة مع الطر قة المغمورة Smf وبالتال فه ل س فقط تقلل من تكال ف اإلنتاج وإنما تعط إنتاج ة عال ة من اإلنز م.هناك الكث ر من األبحاث الت أشارت إلى ارتفاع فعال ة أنز م البكتن ز المنتج من فطر A.niger باستخدام تخمرات الحالة الصلبة مقارنة بالطر قة المغمورة.كما أشار إلى أن كم ة إنز م Polygalactuonase المنتج من فطرA.nigerبطر قة SSF أكثر ب 11 مرة من المنتجة من الفطر نفسه بالطر قة المغمورة ف ح ن أشار إلى أن كم ة اإلنز م ذاته المنتج من فطر A.niger أكثر ب 6 مرات من كم ة اإلنز م المنتجة بطر قة. Smf إن االختالف ف أنتاج اإلنز م ماب ن الطر قة المغمورة وتخمرات الحالة الصلبة عود لعدة أسباب منها انخفاض Catabolic repression ف SSF مقارنة ب Smf وانخفاض انتشار المادة األساس لألح اء المجهر ة ف SSF إضافة إلى مستوى األوكسج ن العال ف طور Solid air مما عزز من سرعة النمو Venkatesh( وآخرون.)2009 263
شكل. 2 فعال ة إنز م البكتن ز المنتج من الفطر A.niger والطر قة المغمورة باستخدام تخمرات الحالة الصلبة المصادر Adriana B.,E. Telma, B. Denise, M. Mauricio and A. Jorge 2002. Evaluation of filamentous fungi and inducers for production of endo-polygalacturonase by solid state fermentation.verlag der Zeitschriftfür Naturforschung,57:666-670 Ahlawat S., B. Battan, S.Dhiman,J.Sharma and Mandhan.2007.Production of the thermostable pectinase and xylanase for their potential application bleaching of kraft pulp. J.Ind.Microbiol Biotechnol.34:763-770. Alkorta I., C. Garbisu, M. LiamaJ and JL. Serra 1998.Industrial application of pectic enzymes, Areview.Proc.Biochem.33:21-28. Bruhlmaum F., K. kim,w.zimmerman and A. Fiechter 1994.Pectinolytic enzymes from Actinomycetes for the degumming of ramie bastfibers. Applied and Environmental Microbiology.60:2107-2112. Cao J., L. Zhengand S. Chen 1992.Screening of pectinase producer from alkalophilic bacteria and study on it, s potential application degummines of ramie.enzyme and Microbial Technology. 14:1013-1016. Davis N.D.and W.T. Blevins. 1979.Methods for laboratory fermentation. In Microbial Technology.Vol.2(ed by PepplerH.J.and Perlman D.)2 nd ed., Academic AcademicPress.London. DalviP.and P.Anthappan. 2006. Amylase and pectinase from singl source for simultaneous desizing and scouring. Indian Journal of Fibre and Textile Research.32:459-465. Domsch K.H. and W. Gams. 1988.Compendium of soil fungi.vol.(1),(ed. By DomscK.H.and Gams W.)London, Academic Press. Evnesto F., V. Tania and G. Viniegra 2006.Production of hydrolytic depolmerising pectinase.food Technol. Biotechnol.44(2):221-227. Giani A., M.Glenio, A.Jorge,E.Telmaand and B. Nelson. 2007.Colum bioreactpr use for optimization of pectinase production in solid substrate cultivation.brazilian Journal of Microbiology,38:557-562. HarriganW.F.and M.K.McCance. 1976.Laboratory methods in food and dairy microbiology.academicpress,london,new york. HoondalGS., RP Tiwari.,R.Tiwari, N.Dahiya and QK. Beg. 2000.Microbaial alkaline pectinases and their application: Areview.Appl.Microbiol.Biotechnol.9:409-418. Jayani R.,S. Saxena and R.Gupta. 2005.Microbial pectinolyticenzymes:areview, Process Biochem. 40:2931-2944. 264
Kashyap DR., PK. Vohra, S. Chopra and R. Tewari. 2001. Application of pectinasesin the commercial sector: Areview. Biores. Technol. 77:215-227. Ladjama A., Z. Taibi, and A. Meddour. 2007.Production of pectinolytic enzymes using St using Streptomyces strains isolated from palm soilinbiskra area (Algeria). African Crop Science Conference Proceedings, 8:1155-1158. Lali K., Z. Nino,J.Maya, U. Tamar,K.Rusudan and K. Izolda. 2009.Selection of microscopic fungi-pectinase producers. Bulletin of the Georgian National Academy of Sciences.3(1).pp 345-356. Narie K.,D.Kevin and B.Stephen. 2002.Comparative enzyme production by fungi diverse lingocellulosicsubstrates.the Journal of Microbiology, 40(3):241-244. Natalia M., R. Simone, D. Roberto and G.Eleni. 2004.Pectinase production by fungal strains in solid state fermentation using agro-industrial bioproduct. Brazilian Archives of Biology and Technollogy.36(2): 342-351. Nazneen A.,M.Alam, U.Azim, B.Feroza,S.Tipu and A.Abulkalam 2011.Production of pectinase Aspergillusnigercultured solid state media.international Journal of Biosciences. 1(1):33-42. Ranveer S.,S.Saxena and R. Gupta. 2005.Microbial pectinolyticenzymes :Areview. Proc. Biochem.40:2931-2944. Raper K.B.and D.I.Fennel. 1965. The Genand Fennel D.I. 1965. The Genus Aspergillus.The Williams and Wilkins Company. Reda A.,M.Hesham,A.Mahmoud and Z.Ebtsam. 2008.Production of bacterial pectinase(s) from agro-industrial wastes under solid state fermentation conditions.journal of Applied Sciences Research, 4(12):1708-1721. Reid I., and M.Richard. 2000.Pectinase in paper making solving retention problems in mechanicntion problems in mechanical pulps bleached with hydrogen peroxide.enz.microbiol.technol.26:115-123. Revilla I., S.Ganzalez and Ml. Jos. 2003.Addition of pectolytic enzymes: Anenological practice which improves the chromaticity and stability of red wines. Int. J. Food Sci.Technol.38:29-36. Salazar L. and U.Jayasinghe. 1999.Fundamentales of purification of Plant viruses. In: Techniques in Plant Virology,Cip,Training Manual Jo, Virus Purification,International Potato Centre, Peru. 1-10. Simb A. 2009.The roleof pectinase enzyme in the development of soft rot Caused by Pseudomonas fluorecens in the purple variety of on ions (Allium Cepa).African Journal of Microbiology Researeh. 3(4):163-167. Urmila P.,D.Vikram, S.Shobhna and B.Chadha. 2005. Pectinase and Polygalactur0nase production by athermophilicaspergillusfumigatus Isolated from decomosting orange peels.braz. J. Microbiol. 36(1):77-84. 265
Venkatesh M. D. And Girija. 2009. Micrbial pectinase from tropical fruit Wastes.Journul of Tropical Agriculture. 47(1-2):67-69. Venugopal P.,T.Jayachandra and KA.Appaiah 2007. Effect of aeration Of production of endo-pectinase from coffe pulp by anovelthermophilic Vibha B. 2010. Exploitation of micro-organism for isolation and screening Of pectinase from environment.globelics Innovation work for Society: Linking, Leveraging and Learning. Malaysia. Vivek R.,M.Rajasekharan, R.RavichandranK.Sriganesh and V.Vaithees. 2010.Pectinase production from orange peel extraction and dried orange peel solid as substrates using Aspergillus niger.international Journal of Biotechnology and Biochemistry.6(3):445-453. PRODUCTION OF PECTINASE FROM ASPERGILLUS NIGER BY USING SOME FRUIT PEELS Elham Esmael Al-Shamary Badaa Hatam Kadem *Dept. of Food Sci. & Biotech - Coll. Of Agri. Coll. Of Agri- Baghdad Univ. elhamfadel@yahoo.com ABSTRACT Ten filamentous fungi isolated from a growaste samples.three isolated were of high productivity for pectinase enzyme compared with other isolates, depending on diameter of clear hydrolyzed zones on the medium plates containing commercial pectin as sole carbon source, this isolates were Aspergillusniger (A 2 ),closely followed byaspergillus sp.(a 1 ) and penicillum sp.(p 1 ). The three isolates also produced pectinases with different a growastes ( Orange peels, Apple peels, Banana peels)as the sole carbon source,aspergillusniger(a 2 ) was the best isolate for pectinase production on the medium containing orange peels as the sole carbon source. Peak pectinase activity of 675 and 370 u/mg protein was respectively obtained by solid state fermentation (ssf) and submerged fermentation (smf) for A.niger(A 2 ).Solid state fermentation yielded higher levels of pectinase activity than the submerged fermentation. The strain of A.niger(A 2 ) have good prospect for pectinase production,and the orange peels is a good low cost fermentation substrate for pectinase production by the investigated isolate Key words: pectinase, Aspergillus niger 266
267